Pure Saposhnikovia divaricata oalje foar kearsen en sjippe meitsjen gruthannel diffuser essensjele oalje nij foar reidbrander diffusers
koarte beskriuwing:
2.1. Tarieding fan SDE
De wortelstokken fan SD waarden kocht as in droege krûd fan Hanherb Co. (Guri, Korea). De plantmaterialen waarden taksonomysk befêstige troch Dr. Go-Ya Choi fan it Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). In boneksimplaar (nûmer 2014 SDE-6) waard deponearre yn it Koreaanske Herbarium fan Standard Herbal Resources. Droege wortelstokken fan SD (320 g) waarden twa kear ekstrahearre mei 70% ethanol (mei in 2 oeren reflux) en it ekstrakt waard doe konsintrearre ûnder ferlege druk. De ôfkooksel waard filtere, lyofilisearre en opslein by 4 °C. De opbringst fan droege ekstrakt fan rûge útgongsmaterialen wie 48,13% (w/w).
Chromatografyske analyze waard útfierd mei in HPLC-systeem (Waters Co., Milford, MA, Feriene Steaten) en in fotodiode-array-detektor. Foar de HPLC-analyze fan SDE waard de prim-O-glucosylcimifugin-standert waard oankocht fan it Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ensek-O-glukosylhamaudol en 4′-O-β-D-glukosyl-5-O-methylvisamminol waarden yn ús laboratoarium isolearre en identifisearre troch spektrale analyses, benammen troch NMR en MS.
SDE-monsters (0,1 mg) waarden oplost yn 70% ethanol (10 mL). Chromatografyske skieding waard útfierd mei in XSelect HSS T3 C18-kolom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, Feriene Steaten). De mobile faze bestie út acetonitril (A) en 0,1% azijnzuur yn wetter (B) mei in streamsnelheid fan 1,0 mL/min. In mearstaps gradiëntprogramma waard brûkt as folget: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min), en 20–65% A (23–40 min). De deteksjegolflingte waard skend by 210–400 nm en opnommen by 254 nm. It ynjeksjevolume wie 10,0μL. Standertoplossingen foar de bepaling fan trije chromonen waarden taret by in definitive konsintraasje fan 7,781 mg/mL (prim-O-glukosylcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukosyl-5-O-methylvisaminol), en 31.125 mg/mL (sek-O-glukosylhamaudol) yn methanol en bewarre by 4 °C.
2.3. Evaluaasje fan anty-inflammatoire aktiviteitYn Vitro
2.3.1. Selkultuer en Stekproefbehanneling
RAW 264.7-sellen waarden krigen fan 'e American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, Feriene Steaten) en groeid yn DMEM-medium mei 1% antibiotika en 5,5% FBS. Sellen waarden ynkubearre yn in befochtige sfear fan 5% CO2 by 37 °C. Om de sellen te stimulearjen, waard it medium ferfongen troch farsk DMEM-medium, en lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, Feriene Steaten) by 1μg/mL waard tafoege yn oanwêzigens of ôfwêzigens fan SDE (200 of 400μg/mL) foar in ekstra 24 oeren.
2.3.2. Bepaling fan stikstofmonokside (NO), prostaglandine E2 (PGE2), tumornekrosefaktor-α(TNF-α), en Interleukin-6 (IL-6) Produksje
Sellen waarden behannele mei SDE en stimulearre mei LPS foar 24 oeren. NO-produksje waard analysearre troch nitrit te mjitten mei it Griess-reagens neffens in eardere stúdzje [12]. Útskieding fan 'e inflammatoire cytokines PGE2, TNF-α, en IL-6 waard bepaald mei in ELISA-kit (R&D-systemen) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant. De effekten fan SDE op NO- en cytokineproduksje waarden bepaald by 540 nm of 450 nm mei in Wallac EnVision™mikroplaatlêzer (PerkinElmer).
2.4. Evaluaasje fan Anti-osteoarthritis AktiviteitYn Vivo
2.4.1. Dieren
Manlike Sprague-Dawley-rotten (7 wiken âld) waarden kocht fan Samtako Inc. (Osan, Korea) en ûnder kontroleare omstannichheden mei in 12-oere ljocht/tsjuster-syklus by°C en% fochtigens. Rotten krigen in laboratoariumdieet en wetterad libitumAlle eksperimintele prosedueres waarden útfierd yn oerienstimming mei de rjochtlinen fan 'e National Institutes of Health (NIH) en goedkard troch de Animal Care and Use Committee fan 'e Daejeon Universiteit (Daejeon, Republyk Korea).
2.4.2. Ynduksje fan OA mei MIA yn rotten
De bisten waarden willekeurich yndield en tawiisd oan behannelingsgroepen foar it begjin fan 'e stúdzje (per groep). MIA-oplossing (3 mg/50μL fan 0,9% sâltwetter) waard direkt ynjektearre yn 'e intra-artikulêre romte fan' e rjochterknibbel ûnder anaesthesia feroarsake mei in mingsel fan ketamine en xylazine. Rotten waarden willekeurich ferdield yn fjouwer groepen: (1) de sâltwettergroep sûnder MIA-ynjeksje, (2) de MIA-groep mei MIA-ynjeksje, (3) de SDE-behannele groep (200 mg/kg) mei MIA-ynjeksje, en (4) de indometacine- (IM-) behannele groep (2 mg/kg) mei MIA-ynjeksje. Rotten krigen 1 wike foar MIA-ynjeksje oraal SDE en IM foar 4 wiken. De dosaasje fan SDE en IM dy't yn dizze stúdzje brûkt waard, wie basearre op dy brûkt yn eardere stúdzjes [10,13,14].
2.4.3. Mjittingen fan de gewichtsferdieling fan 'e efterpoaten
Nei OA-ynduksje waard it oarspronklike lykwicht yn it gewichtsdragende fermogen fan 'e efterpoaten fersteurd. In ûnfermogenstester (Linton instrumentation, Norfolk, UK) waard brûkt om feroaringen yn 'e gewichtsdragende tolerânsje te evaluearjen. Rotten waarden foarsichtich yn 'e mjitkeamer pleatst. De gewichtsdragende krêft dy't troch de efterpoat útoefene waard gemiddeld oer in perioade fan 3 sekonden. De gewichtsferdielingsferhâlding waard berekkene mei de folgjende fergeliking: [gewicht op rjochter efterpoat/(gewicht op rjochter efterpoat + gewicht op lofter efterpoat)] × 100 [15].
2.4.4. Mjittingen fan serumcytokinenivo's
De bloedmonsters waarden sintrifugearre by 1.500 g foar 10 minuten by 4 °C; doe waard it serum sammele en opslein by −70 °C oant gebrûk. De nivo's fan IL-1β, IL-6, TNF-α, en PGE2 yn it serum waarden metten mei ELISA-kits fan R&D Systems (Minneapolis, MN, Feriene Steaten) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant.
2.4.5. Kwantitative RT-PCR-analyze yn echte tiid
Totaal RNA waard ekstrahearre út knibbelweefsel mei it TRI-reagens® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Feriene Steaten), reverse-transkribearre yn cDNA en PCR-amplifisearre mei in TM One Step RT PCR-kit mei SYBR-grien (Applied Biosystems, Grand Island, NY, Feriene Steaten). Real-time kwantitative PCR waard útfierd mei it Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systeem (Applied Biosystems, Grand Island, NY, Feriene Steaten). De primersekwinsjes en de probesekwinsje wurde werjûn yn tabel.1Aliquots fan sample cDNA's en in gelikense hoemannichte GAPDH cDNA waarden amplifisearre mei it TaqMan® Universal PCR-mastermingsel mei DNA-polymerase neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant (Applied Biosystems, Foster, CA, Feriene Steaten). PCR-omstannichheden wiene 2 minuten by 50 °C, 10 minuten by 94 °C, 15 sekonden by 95 °C, en 1 minuut by 60 °C foar 40 syklusen. De konsintraasje fan it doelgen waard bepaald mei de ferlykjende Ct-metoade (drompelsyklusnûmer by krusing tusken amplifikaasjeplot en drompel), neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant.
Artrose (OA) is de meast foarkommende musculoskeletale oandwaning en de meast foarkommende degenerative gewrichtssykte by âlderein [1]. OA is in tastân dy't foar in part feroarsake wurdt troch ferwûning, ferlies fan kraakbeenstruktuer en -funksje, en dysregeling fan pro-inflammatoire en anty-inflammatoire paden [2,3It beynfloedet benammen it artikulêre kraakbeen en subchondrale bonke fan synoviale gewrichten en resulteart yn gewrichtsfalen, wat liedt ta pine by it dragen fan gewicht, ynklusyf rinnen en stean [4].
Der is gjin genêsmiddel foar OA, om't it tige lestich is om it kraakbeen te herstellen as it ienris ferneatige is [5]. De doelen fan behanneling binne om pine te ferminderjen, gewrichtsmobiliteit te behâlden of te ferbetterjen, de sterkte fan 'e gewrichten te fergrutsjen en de útskeakeljende effekten fan 'e sykte te minimalisearjen. Farmakologyske behannelingen fan OA binne rjochte op it ferminderjen fan pine om de gewrichtsfunksje en kwaliteit fan libben fan 'e pasjint te ferbetterjen. Hoewol kraakbeenferneatiging de wichtichste barren is yn OA, is de ôfbraak fan kollageen de fûnemintele ynsidint dy't de ûnomkearbere foarútgong fan OA yn ferbân mei ûntstekking bepaalt [6,7Behannelingen mei anty-inflammatoire en chondrobeskermjende aktiviteit wurde ferwachte pine te ferminderjen en de matrixintegriteit te behâlden by OA-pasjinten.
Dêrom sil it ferminderjen fan ûntstekking wierskynlik foardielich wêze by it behearen fan OA. Resinte stúdzjes suggerearje in beskermjende rol foar krûdeboarnen op 'e foarútgong fan OA, yn termen fan it ferminderjen fan chondrocytenûntstekking en fierdere kraakbeenferneatiging, troch har fermogen om te ynteraksje mei gewrichtsrelatearre weefsels, wat resulteart yn 'e fermindering fan gewrichtspine [8].
De woartel fanSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) is in soad brûkt yn tradisjonele medisinen foar de behanneling fan hoofdpijn, pine, ûntstekking en artritis yn Korea en Sina [9,10De ferskate farmakologyske effekten fanSaposhnikovia divaricata(SD) omfetsje ek ûntstekkingsremmende, pijnstillende, koartsferleegjende en anty-artrityske eigenskippen [9,11In resinte stúdzje liet sjen dat SD-chromonekstrakt potinsjele antireumatoïde artritis-effekten hat yn in mûsmodel fan kollageen-induzearre artritis [10]; lykwols binne der mar in pear stúdzjes útfierd om de anty-inflammatoire en anty-artritis-aktiviteit fan te stypjenSaposhnikovia divaricataekstrakt (SDE).
Dêrom ûndersocht de hjoeddeiske stúdzje de anty-inflammatoire en anti-osteoartritis aktiviteiten fan in 70% ethanol-ekstrakt fan SD. Earst waard it anty-inflammatoire effekt fan SDE evaluearre.yn vitroyn LPS-induzearre RAW 264.7-sellen. Dêrnei waard it anty-osteoartritis-effekt fan SDE metten troch it beoardieljen fan gewichtsferdieling, degradaasje fan artikulêr kraakbeen, en ûntstekkingsreaksjes yn in rattemodel fan mononatriumjodoasetaat- (MIA-)-induzearre OA.